荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。

1. 化学特性  

   - 分子式：C₂₇H₃₄I₂N₄，分子量：668.39，CAS号：25535-16-4。  

   - 外观：红色至暗红色结晶粉末，易吸潮，对光敏感，需避光保存（2~8℃充氩保存）。  

   - 溶解性：  

     - 水溶性：1–2 mg/mL（pH 7.4 PBS）；  

     - 有机溶剂：溶于DMSO（2.5 mg/mL）、乙醇（0.2 mg/mL），不溶于非极性溶剂。  

2. 作用原理  

   - 核酸结合特性：通过嵌入双链DNA/RNA的碱基对间，无序列偏好性（每4–5个碱基结合一个PI分子），结合后荧光强度增强20–30倍。  

   - 光谱变化：  

     | 状态       | 最大激发波长（nm） | 最大发射波长（nm） |  

     |----------------|-------------------|-------------------|  

     | 游离PI     | 493               | 636               |  

     | 核酸结合态 | 535               | 617               |   

   - 膜通透性：  

     - 无法穿透完整细胞膜（活细胞拒染）；  

     - 可进入膜破损细胞（死细胞/晚期凋亡细胞），实现特异性死细胞染色。

使用说明

使用方法

1. 溶液配制

储存液：用去离子水或 PBS 配制 1-10 mg/mL 的浓缩液，0.22 μm 滤膜过滤除菌，分装后于 **-20℃避光保存 **（可稳定 1 年以上，避免反复冻融）。

工作液：使用前用缓冲液（如 PBS、培养基）稀释储存液，常规浓度为1-5 μg/mL（根据实验需求调整，如活细胞染色可适当降低浓度至 0.1-1 μg/mL 以减少毒性）。

2. 染色步骤

固定细胞染色（推荐）：

1 细胞经甲醛或多聚甲醛固定（10-30 分钟），PBS 洗涤 2-3 次；

2（可选）用 0.1% Triton X-100 透化处理 5-10 分钟（增强染料对细胞核的穿透性），PBS 洗涤；

3 加入 DAPI 工作液，室温避光孵育 5-15 分钟；

4 PBS 洗涤 2-3 次以去除未结合的染料，即可进行荧光成像。

活细胞染色：

直接向培养基中加入 DAPI 工作液（终浓度 0.1-1 μg/mL），37℃孵育 5-30 分钟，洗涤后观察（注意：长时间孵育可能对活细胞产生毒性，建议缩短染色时间）。

注意事项

毒性与安全性：

DAPI 对细胞有一定毒性（尤其高浓度时），活细胞染色需控制浓度和时间；

具有潜在致畸性和致癌性，操作时需戴手套、护目镜，避免直接接触皮肤或吸入。

荧光稳定性：

DAPI 荧光在强光下易淬灭，染色后需避光保存，成像时尽量缩短曝光时间。

特异性优化：

若需排除 RNA 干扰，可在染色前用 RNA 酶 A（100 μg/mL）37℃处理 30 分钟，降解细胞内 RNA。

与其他染料的兼容性：

可与多种荧光染料（如 FITC、Cy3、Texas Red）联合使用，因其发射光谱（蓝色）与常见荧光通道重叠较少，适合多色共染实验。

产品仅供研究使用，不适用于人或动物的体外诊断与治疗。

由于实验受多种因素影响具有不确定性，以上说明仅供参考，最终解释权归本公司所有。

数据及应用

核心应用场景

1. 细胞活力与死亡检测  

   - 死细胞标记：与活细胞染料（如Calcein-AM、FDA）联用，同步区分活/死细胞（活细胞：绿色荧光；死细胞：红色核荧光）。  

   - 凋亡/坏死鉴别：早期凋亡细胞膜完整（PI阴性），晚期凋亡/坏死细胞膜破损（PI阳性）。  

2. 细胞周期与DNA含量分析  

   - 流式细胞术：通过PI染色定量DNA含量，分析细胞周期（G0/G1、S、G2/M期）：  

     - G0/G1期：荧光强度=1；  

     - G2/M期：荧光强度≈2；  

     - 凋亡细胞：Sub-G1峰（荧光强度<1）。  

   - 关键参数：变异系数（CV）需控制在5–8%，乙醇固定可降低CV值。  

3. 多色荧光复染  

   - 核定位标记：作为红色复染剂，与绿色（FITC）、蓝色（DAPI/Hoechst）荧光兼容，用于多重染色（如免疫荧光、FISH）。  

   - RNA干扰：需用RNase预处理以消除RNA结合背景。  

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