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包装规格：5mg 25mg 100mg in glass bottle
产品简介：一种有效的 Mre11-Rad50-Nbs1 (MRN) 复合物抑制剂。Mirin 在不影响 ATM 蛋白激酶活性的情况下阻止 ATM (ataxia-telangiectasia mutated) 的 MRN 依赖性激活 (IC50=12 μM)，并抑制 Mre11 相关的核酸外切酶活性。Mirin 可消除哺乳动物细胞中的 G2/M 检查点和同源性依赖性修复。Mirin 在哺乳动物细胞中阻止 ATM 因 DNA 双链断裂 (DSBs) 而激活并阻断同源性定向修复 (HDR)。
溶解性：溶于DMSO(44mg/mL )
储备液保存：-80°C, 2 years; -20°C, 1 year。
体内实验：1、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→40% PEG300→5% Tween-80→45% Saline Solubility: ≥ 1 mg/mL (4.54 mM); 澄清溶液 此方案可获得 ≥ 1 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。 以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 10.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。 2、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→90% (20% SBE-β-CD in Saline) Solubility: ≥ 1 mg/mL (4.54 mM); 澄清溶液 此方案可获得 ≥ 1 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。 以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 10.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-环糊精）粉末定容于 10 mL 的生理盐水中，完全溶解至澄清透明。 3、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→90% Corn Oil Solubility: ≥ 1 mg/mL (4.54 mM); 澄清溶液 此方案可获得 ≥ 1 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液，此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。 以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 10.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 玉米油中，混合均匀。 ＜1mg/ml表示微溶或不溶。 普西唐提供的所有化合物浓度为内部测试所得，实际溶液度可能与公布值有所偏差，属于正常的批间细微差异现象。 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
体外研究：Mirin (50, 100, 500 μM) 抑制 Nbs1 和 Chk2 的 ATM 依赖性磷酸化以及响应DNA 双链断裂(DSB) 而在 Ser1981 处 ATM 的 MRN 依赖性自磷酸化。(Z)-Mirin (100 μM) 抑制Mre11 核酸酶活性。Mirin (10-100 μM；24 小时) 在 50 μM 剂量在 HEK293 细胞中产生 50% 细胞毒性。Mirin (10-100 μM) 在 50 μM 和 100 μM 浓度下诱导显着的 G2 停滞。 Mirin (18 µM；48 小时) 增加 PEO4 细胞的凋亡。
激酶实验：核酶试验： 寡聚核苷酸非发卡底物的反应液包含 25 mM MOPS (pH 7.0，60 mM KCl，0.2% Tween 20，2 mM DTT，1 mM或 5 nM MnCl2 (或者 5 mM MgCl2，或者 5 mM CaCl2)，0.1 pmol 的 DNA 底物，以及 0.3 pmol 的Mre11 (或者相等数量的 Mre11 和 Rad50 混合物)终体积 10 μl，37°C 孵育 30 min。然后加入 SDS，EDTA 和proteinase K 使其终浓度分别达到 0.2%，5 mM 和 0.1 mg/ml，继续孵育 15 min。取 4 μl 的反应液与4 μl 的甲酰胺loading buffer 混合，然后放到含有 10%丙烯酰胺和 7 M 尿素的凝胶中。电泳之后，用荧光成像系统分析。寡聚核苷酸发卡底物的反应液与非发卡底物基本相同，不同的是要加入 3 pmolMre11 以及反应条件是室温孵育过夜。非同源末端反应液包含 25 mM MOPS (pH 7.0)，60 mM KCl，0.2% Tween 20，2 mM DTT，4 mM MgCl2，2 mM MnCl2，0.5 mM ATP，4 ng 质粒 DNA 10%聚乙烯乙二醇，0.01 pmol 人源 DNA 连接酶I，以及0.06 pmol Mre11 或者 0.1 单位 E. coli 外切酶 III，终体积 10 μl。在 37°C 孵育 25 min 后，加入Tween 20 使其终浓度达到 0.5%，用引物 DAR5 和 DAR147 进行 PCR 扩增。PCR 的产物用 TA cloning kit 克隆并且用自动的ABI Capillary Genetic Analyzer 进行测序。
细胞实验：细胞系：HEK 293 cells 浓度：100 μM 处理时间：24 h 方法：人源胚胎肾细胞 HEK293 用添加有 5 热灭活胎牛血清，青霉素(100 U/mL)，链霉素(100 mg/mL)的RPMI-1640 培养基在含有 5% CO2，37 °C 的条件下进行培养。每个 48 小时更换新的培养基。细胞接种到96-孔板上，用 mirin（100 μM）预处理一小时，然后加入 cisplatin 后再孵育 8 小时和24 小时。然后利用 EZ-Cytox cell viability assay kit 进行 MTT 测试，MTT 的降低值用酶标仪在 450 nm 波长下进行测定。
保存条件：-20℃
注意事项：1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2、以上信息仅做参考交流之用。

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