Techisun Magnetic Gel Extraction Kit

通用型DNA 纯化回收试剂盒（磁珠法）

产品货号：TN004

产品简介

本产品适合于从各种浓度的琼脂糖凝胶中回收60 bp-20 kbp DNA 片段。本产品也适合于从PCR 产物中、酶促反应液中或由各种方法获得的粗制的DNA(包括基因组DNA)中回收纯化DNA。试剂盒采用磁珠纯化技术,可避免柱式法提取DNA时反复离心等手工操作流程。DNA 回收效率高达85%以上,纯化的DNA 可直接用于自动测序、连接、酶切、PCR、标记等。本试剂盒采用高结合力磁珠,适合于从100~300 mg 的凝胶块中回收DNA,可最大程度提高产物的浓度。本试剂盒适用于手动操作及自动化工作站,适合于各种情况的DNA 回收。

产品组分

产品编号	TN004-01/50T	TN004-002/100T
Buffer GDP	30mL	60mL
Buffer WB*	12mL	24mL
Elution Buffer	6mL	12mL
磁珠悬浮液	1mL	1mL×2

 

*按瓶子标签所示,加入4倍体积的无水乙醇至Buffer WB,于室温保存。

需自备试剂：异丙醇、无水乙醇。

 

实验步骤

一、琼脂糖凝胶DNA 回收

1、配制合适浓度的琼脂糖凝胶,电泳分离DNA 片段。当DNA 片段分离后,把凝胶放置于紫外/蓝光灯下,快速切下含目的DNA 片段的凝胶,并尽量去除多余的凝胶。

2、称取凝胶块的重量,并转移至1.5 mL离心管中。加入2倍体积Buffer GDP（100 mg 凝胶块换算为100 μL体积,），60°C水浴约10分钟直至凝胶块完全溶解。期间可将离心管颠倒混匀3次，有利于加速溶胶。

3、完全溶胶后，将离心管放置室温，加入80 μL异丙醇（自备），用移液枪吹吸混匀后，加入20  μL磁珠，吹吸混匀，室温静置10 min，期间可将离心管颠倒混匀3-5次。将离心管置于磁力架中，磁吸1 min，待磁珠完全吸附至溶液澄清后，小心吸弃上清液，注意不要吸到磁珠。

4、向离心管中加入500 μL Buffer WB（需加入无水乙醇后吸附）,用涡旋振荡仪混匀磁珠,将离心管放置于磁力架上,磁吸1 min，待磁珠完全吸附至至溶液澄清后，小心吸弃上清液

5、重复步骤4。

6、保持离心管在磁力架上,打开管盖，室温干燥5分钟,使磁珠表面的乙醇完全挥发。注意干燥时间过久会影响到磁珠的洗脱效率。

7、从磁力架上取下离心管,加入30~50 μL Elution Buffer，用移液枪轻轻吹打混匀磁珠,室温放置10 min后。将离心管置于磁力架中，磁吸1 min，待磁珠完全吸附至溶液澄清后，小心吸取上清液至新的离心管中,所得溶液即为纯化后的DNA样品，放于-20℃保存。

二、从反应液中纯化DNA

1、短暂离心PCR 产物、酶促反应液,或粗制DNA 产物(包括基因组DNA)。用移液枪测量其体积,并转移至灭菌的1.5mL 离心管中。
若样品体积小于100 μL，用灭菌水调整至100 μL。高浓度的基因组DNA 最好用灭菌水稀释至300 μL,以提高回收效率。

2、加入2倍体积的Buffer GDP，涡旋混匀。加入20 μL磁珠悬浮液，颠倒混匀，室温放置5 min，使DNA与磁珠充分结合。
若需回收小于100bp DNA 片段,再加入1.5倍体积无水乙醇(样品+Buffer GDP 的体积)。

3、将离心管放置于磁力架上,静置1分钟使磁珠完全吸附于管壁。小心吸弃上清液。按实验一的第4~7步进行操作。

 

 

常见问题

1.回收效率低

• 凝胶未充分溶解:溶胶时,50~55°C水浴7~12分钟,其间颠倒混匀数次,让凝胶充分溶解。

• 凝胶用量过多:过量的凝胶会降低回收率,切胶时尽量去除多余的凝胶。

• 溶胶液不足:Buffer GDP 加入量不能低于凝胶重量的1倍。处理>2%凝胶时,Buffer GDP 加入量最好控制在2~3倍。

• 洗脱不充分:建议用洗脱液洗脱两次,以获得最高的回收率。洗脱效率取决于洗脱体积和次数。

• 试剂准备有误:Buffer WB 没有加入乙醇稀释或体积不准确(乙醇浓度需控制在80%)。

• 磁珠用量不足:适当增加磁珠用量可提高DNA回收率,但过多磁珠会降低产物浓度。

2.回收后出现杂带

• DNA 变性:有些DNA 片段对温度比较敏感,杂带有可能是单链的DNA。降低溶胶温度至37~50°C。降低温度,可延长溶胶时间至20~40分钟让凝胶充分溶解。

3.连接不理想

• 乙醇污染:洗脱DNA 前,保持离心管在磁力架上,开盖空气干燥10~15分钟以彻底去除乙醇。

• 核酸变性:降低熔胶温度至37~50°C。降低温度,可延长溶胶时间至20~40分钟让凝胶充分溶解。降低温度能有效减少核酸的脱嘌呤和变性的影响。

保存条件

本产品可在室温下保存18个月。低温下,Buffer GDP 可能有沉淀出来,使用时须加热至55°C使沉淀溶解。Magnetic Beads 需于2~8°C保存,避免反复冻融。

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本产品适合于从各种浓度的琼脂糖凝胶中回收60 bp-20 kbp DNA 片段。本产品也适合于从PCR 产物中、酶促反应液中或由各种方法获得的粗制的DNA(包括基因组DNA)中回收纯化DNA。试剂盒采用磁珠纯化技术,可避免柱式法提取DNA时反复离心等手工操作流程。DNA 回收效率高达85%以上,纯化的DNA 可直接用于自动测序、连接、酶切、PCR、标记等。本试剂盒采用高结合力磁珠,适合于从100~300 mg 的凝胶块中回收DNA,可最大程度提高产物的浓度。本试剂盒适用于手动操作及自动化工作站,适合于各种情况的DNA 回收。