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ETP-46464  ≥98%

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包装规格：5mg 10mg 25mg 50mg 100mg in glass bottle
产品简介：一种有效的mTOR和ATR抑制剂，IC50分别为0.6和14nM。
溶解性：溶于DMSO（5 mg/mL 超声）
储备液保存：-80°C, 2 years -20°C, 1 year
体内实验：1、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→40% PEG300→5% Tween-80→45% Saline Solubility: ≥ 0.5 mg/mL (1.06 mM); 澄清溶液 此方案可获得 ≥ 0.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。 以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 5.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。 ＜1mg/ml表示微溶或不溶。 普西唐提供的所有化合物浓度为内部测试所得，实际溶液度可能与公布值有所偏差，属于正常的批间细微差异现象。 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
靶点：mTOR:0.6nM (IC50);ATR：14 nM (IC50);ATM:545nM (IC50) DNA-PK:36 nM (IC50);PI3Kα:170nM (IC50)
体外研究：ETP-46464 (ATRi) also inhibits DNA-PK, PI3Kα and ATM with IC50s of 36 nM, 170 nM and 545 nM, respectively. Platinum-sensitive and -resistant ovarian, endometrial and cervical cancer cell lines are treated with varying levels of Cisplatin (0-50 µM) with or without the ETP-46464 (5.0 µM) and/or the KU55933 (10.0 µM) for 72 h. Single-agent dose response analyses of ETP-46464 and KU55933 in a subset of cell lines reveal a wide LD50 range of 10.0±8.7 and 38.3±7.6 µM respectively. Co-treatment doses are chosen based on these studies and previously published evidence of phospho-Chk1 (Ser345) and phospho-ATM (Ser1981) inhibition following ionizing radiation exposure and dose response treatments with ETP-46464 and KU55933. Treatment with ETP-46464 significantly increases the response of Cisplatin in all cell lines tested, resulting in 52-89% enhancement in activity and are synergistic. The combined inhibition of ATR and ATM enhances the response of Cisplatin to a level equivalent to that observed using ETP-46464 alone. These effects are independent of p53 status, and are observed in all gynecologic (GYN) cancer cells tested. Treatment with ETP-46464, but not KU55933, not only sensitizes these GYN cancer cell lines to Cisplatin, but also enhances the response of Carboplatin.
激酶实验：ATR激酶活性实验： 用于体外激酶测定的Flag标记的ATR激酶选自293T细胞用抗-FLAG M2亲和凝胶免疫沉淀。作为底物，p53/1-101肽与GST融合蛋白是通过常规的GST纯化方法从IPTG刺激的BL21细菌里纯化的。简单地说，pBJF-flag-ATR质粒（野生型和激酶）转染入293T细胞。转染48小时后，细胞被溶解在TGN缓冲液（50 mM的Tris（pH值7.5），50 mM的甘油磷酸盐，150 mM氯化钠，10％甘油，1％吐温-20和蛋白酶抑制剂混合物）中，在冰上15分钟，之后离心分离，将上清液用非特异的兔IgG和蛋白A在旋转器上4度预清除1小时。接下来，将上清液置于M2-浆液4℃孵育2小时。对293T细胞融合的p100板，400μL缓冲液中，10微克的IgG，蛋白30μL的蛋白A浆液，和25μL M2磁珠被使用。抗FLAG M2磁珠在冰冷TNG中洗涤5次，在冰冷的LiCl缓冲液洗3次（100 mM pH值7.5的Tris，0.5M的LiCl）和冰冷的激酶缓冲液洗5次（10 mM HEPES（pH 7.5），50 mM氯化钠，10mM MgCl 2，10mM Mn2，1mM DTT）。最后一次洗涤后，IPs被分在适当数量的管中测定（每使用情况下约1块 293T P100）。100 μM的“冷”ATP被添加到缓冲液中进行激酶反应。只使用新鲜的IPs。在此之前制备含2微克的GST-p53和10 μ Ci of 32P-γATP的混合物。抑制剂首先加入到珠。最后，25μL加入到每个管中。在30度反应进行20分钟，并通过添加15毫升4× NuPAGE SDS缓冲液，并煮沸5分钟停止。磁珠沉淀，上清液通过SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶回收。放射性凝胶略洗，直接暴露在基色荧光粉成像2小时至16小时。然后用STORM扫描仪检测其放射性。最后，凝胶染色，考马斯亮蓝检查蛋白水平。
保存条件：-20℃
注意事项：1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2、以上信息仅做参考交流之用。

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