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CW069  ≥98%(HPLC)

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包装规格：5mg 25mg in glass bottle
产品简介：一种微管运动蛋白HSET的别构抑制剂，IC50:75μM。
溶解性：溶于DMSO(≥52mg/mL)
储备液保存：-80°C, 2 years -20°C, 1 year
体内实验：1、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→40% PEG300→5% Tween-80→45% Saline Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM); 澄清溶液 此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。 以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。 2、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→90% (20% SBE-β-CD in Saline) Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM); 澄清溶液 此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。 以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。 3、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→ 90% Corn Oil Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM); 澄清溶液 此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液，此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。 以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。 ＜1mg/ml表示微溶或不溶。 普西唐提供的所有化合物浓度为内部测试所得，实际溶液度可能与公布值有所偏差，属于正常的批间细微差异现象。 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
靶点：HSET:75 μM (IC50)
体外研究：CW-069 is an allosteric inhibitor of HSET with an IC50 of 75 μM. CW-069 shows statistically significant selectivity over KSP. CW-069 potently suppresses N1E-115 cells, and less potently inhibits the NHDF cells, with IC50 of 86 ± 10 μM and 181 ± 7 μM, respectively. CW-069 (100 or 200 μM) causes increased multipolar spindles in N1E-115 cells with supernumerary centrosomes and shows no effect on altering bipolar spindle morphology in normal human dermal fibroblast cells. CW-069 (200 μM) cacuses multipolar anaphase and cell death induced in N1E-115 cells via transfection with HSET siRNA, and antagonizes inhibition of KSP by monastrol, but does not exert mitotic arrest in HeLa cells.
激酶实验：体外酶催化的ATPase试验： 优化该协议用于全长，N端，6His标记的HSET 和KSP，并测量MT-刺激的蛋白质活性。通过丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶反应将ATP的水解与NADH的氧化耦合，从而以分光光度法观察HSET/KSP 的Gsp合成酶活性的抑制。试验通过将纯化的Gsp合成酶/酰胺酶(12.8 nM)加入试验混合物起始，试验混合物包含以下成分(终浓度)：6 nM蛋白质，0.07 mg/ml MTs (大学生物制剂)，1.56 mM 谷胱甘肽，10 mM 亚精胺，2 mM ATP，2.7 mM MgCl2，1 mM磷酸(烯醇)-丙酮酸，0.2 mM NADH，50 μg/ml 乳酸脱氢酶，100 μg/ml 丙酮酸激酶，以及不同浓度的抑制剂，均溶解在50 mM Na PIPES (pH 6.8)中，温度为37°C。ADP-Glo检测试验(Promega)根据制造商的指示进行。所有化合物使用多点BioMek Nxp进行。板使用Pherastar酶标仪读取。
细胞实验：细胞系：N1E-115细胞，NHDF和初级人骨髓细胞 浓度：~400 μM 处理时间：72小时 方法：细胞在DMEM中在37°C和5% CO2下培养，用10%胎牛血清(FCS)增补。在磺酰罗丹明B比色(SRB)试验中，所有使用的化合物溶解在DMSO中，并在培养基中稀释为0.2% DMSO的终浓度。对于SRB试验和活细胞成像，将细胞以2,500细胞/孔的密度接种在96孔板。24小时后，细胞用化合物处理72小时，每个浓度重复3个孔。对于SRB试验，细胞随后用三氯乙酸(TCA)固定，并用SRB着色。荧光性使用Infinite 200 PRO板阅读器在545 nm波长下定量。化合物处理的孔与溶剂对照孔进行比较，导致50%溶剂对照组细胞生长的化合物浓度定为IC50浓度，使用Graphpad PRISM 6计算。每个试验至少进行三次生物学平行测定。
保存条件：-20℃
注意事项：1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2、以上信息仅做参考交流之用。

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